摘要 采用鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗、干擾試驗和對比試驗。結(jié)果表明將乳酸左氧氟沙星注射液稀釋4倍,可用靈敏度為0.125 EU.ml-1的鱟試劑作細(xì)菌內(nèi)毒素檢查,與家兔熱原檢查法結(jié)果一致。
關(guān)鍵詞 熱原,細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法
細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法與熱原檢查法相比,成本低、快速簡便、靈敏度高。為探討采用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法檢測乳酸左氧氟沙星注射液熱原的可行性,我們進行了鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗、干擾試驗和對比試驗。結(jié)果表明細(xì)菌內(nèi)毒素檢查可替代家兔熱原檢查法檢測乳酸左氧氟沙星注射液熱原。報告如下。
1 實驗材料
鱟試劑(批號990402,標(biāo)示靈敏度0.125 EU.ml-1,湛江海洋生物制品廠);細(xì)菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品(批號981,規(guī)格9000 EU.支-1,中國藥品生物制品檢定所);鱟試劑溶解水(批號990430,規(guī)格2ml.支-1,湛江海洋生物制品廠);乳酸左氧氟沙星注射液(批號981202、981206、981226,規(guī)格100 ml∶0.2 g,山東潔晶集團日照海洋制藥廠);家兔(新西蘭兔,青島市實驗動物動物實驗中心提供)。
2 實驗方法與結(jié)果
2.1 鱟試劑靈敏度復(fù)核[1] 將細(xì)菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品用鱟試劑溶解水溶解,在漩渦混旋器上混合15 min,然后制備成0.25、0.125、0.0625、0.0312 EU.ml-1的溶液,進行靈敏度復(fù)核試驗,結(jié)果(見表1)。
表1 鱟試劑靈敏度復(fù)核
細(xì)菌內(nèi)毒素溶液濃度 0.25 0.125 0.0625 0.0312 陰性對照
(EU.ml-1) + + - - -
+ + - - -
+ + - - -
+ + - - -
本批鱟試劑標(biāo)示靈敏度λ為0.125EU.ml-1,批號990402
本研究所用鱟試劑標(biāo)示靈敏度λ為0.125 EU.ml-1,測得靈敏度λc為0.125 EU.ml-1,λc在標(biāo)示靈 敏度λ的0.5~2.0倍之間,可以用于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。
2.2 干擾試驗[2]
2.2.1 內(nèi)毒素理論限值確定 采用公式L≤K.M-1計算出乳酸左氧氟沙星注射液內(nèi)毒素理論限值。其中K為家兔和人的致熱閾(5EU.kg-1)[3],M為家兔靜脈注射劑量(10 ml.kg-1)[4]。計算得本品內(nèi)毒素理論限值為0.5 EU.ml-1。
2.2.2 干擾試驗 按公式MVD=CL/λ計算出乳酸左氧氟沙星注射液最大有效稀釋倍數(shù)為4倍。取熱原合格的乳酸左氧氟沙星注射液(批號9811202),用鱟試劑溶解水分別按1∶2、1∶4稀釋,再分別用來溶解細(xì)菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品,并稀釋成系列濃度的內(nèi)毒素溶液。與用水配制的相應(yīng)濃度的內(nèi)毒素溶液同時與同一批號的鱟試劑進行比較,若兩者反應(yīng)終點均在0.5~2.0 λ范圍內(nèi),且λs/λT為0.5~2.0,則認(rèn)為對細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法無干擾作用。反之,則有干擾作用。λs:用水配制的內(nèi)毒素溶液測出的鱟試劑靈敏度,λT:用水配制的內(nèi)毒素溶液測出的鱟試劑靈敏度。結(jié)果(見表2)。
表2 干擾試驗結(jié)果
鱟試劑批號 供試品批號 稀釋倍數(shù) λc/EU.ml-1 λs/λT
990402 981202 1→2 >0.25 <0.5
1→4 0.125 1
981206 1→2 >0.25 <0.5
1→4 0.125 1
981226 1→2 >0.25 <0.5
1→4 0.125 1
本批鱟試劑標(biāo)示靈敏度λ為0.125 EU.ml-1,供試品為山東省潔晶集團日照海洋制藥廠生產(chǎn)。
結(jié)果表明乳酸左氧氟沙星注射液經(jīng)1∶4稀釋后對細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法無干擾作用。另取2個批號的乳酸左氧氟沙星注射液重復(fù)試驗,結(jié)果相同。
2.2.3 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法與家兔法對比試驗 根據(jù)上述干擾試驗結(jié)果和計算所得乳酸左氧氟沙星注射液的內(nèi)毒素理論限值,我們對10批乳酸左氧氟沙星注射液進行了細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法和家兔熱原法的對比試驗。將乳酸左氧氟沙星注射液稀釋4倍,采用靈敏度為0.125 EU.ml-1的鱟試劑進行檢測,與供試品陽性對照同時檢測,結(jié)果細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法全部陰性,家兔法也全部合格,兩法一致。
3 小結(jié)與討論
鱟試劑靈敏度實驗表明試驗所用鱟試劑符合規(guī)定要求。干擾試驗表明乳酸左氧氟沙星注射液稀釋4倍后對細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法無干擾作用。細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法和家兔法結(jié)果一致。表明乳酸左氧氟沙星注射液用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法檢查熱原是可行的。
楊曉峰(山東省青島市藥品檢驗所 青島266071)
李升剛(山東省青島市藥品檢驗所 青島266071)
慕紅丹(山東省青島市藥品檢驗所 青島266071)
參考文獻
[1]國家藥典委員會編:中華人民共和國藥典.1995年版;1998增補本,143
[2]國家藥典委員會編:中華人民共和國藥典.1995年版;1998增補本,143~144
[3]夏振民:藥品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的限值 藥物分析雜志 1995;15(3)∶54
[4]中華人民共和國國家藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)WS—182(X—159)—97
本文來自: 醫(yī)學(xué)論文(yxlw.org) 詳細(xì)出處參考:http://www.yxlw.org/html/lunwen/yaoxue/20100124/26763.html |