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| 購買進(jìn)口儀器、試劑和耗材——就在始于2001年的畢特博生物 kjhfd.cn |
關(guān)鍵詞 注射用阿昔洛韋；細(xì)菌內(nèi)毒素；干擾試驗(yàn) Test of Bacterial Endotoxin on Aciclovir For Injection Zhang QiuYue，Zhang Ye Henan Proaincial Hospital Anyang,Henan,455000,China Abstract Objectives To establish a method for test of bacterial endotoxin on aciclovir for injection.Methods By interfere test,to study the inhibitive action of Aciclovir For Injection in bacterial endotoxins test. Results The injection did not interfere with tachypleus amebocyte lysate in the concentration diluted to 0.8 mg?ml-1. Conclusion Bacterial Endotoxin test (gel-clot method) can be used as an alternative method for the rabbit pyrogen test for Aciclovir For Injection 《中國藥典》2005年版規(guī)定的方法為熱原檢查法。細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法為替代熱原檢查法的一種檢測(cè)方法，目前已被各國藥典所采用。為此，參照《中國藥典》2005年版細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法［１］，考察了注射用阿昔洛韋對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的干擾情況，為其建立細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 1 實(shí)驗(yàn)材料 ZH-2型旋渦混合器（天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠）；DS1型恒溫水浴箱（北京市醫(yī)療設(shè)備總廠）；細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)20030829，每支8EU）；細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（海洋生物制品廠，批號(hào)20031020，每支2ml）；鱟試劑（海洋生物制品廠，批號(hào)20040109，靈敏度0.25 EU?ml-1；湛江安度斯生物有限公司，批號(hào)20030824靈敏度0.25 EU?ml-1）；注射用阿昔洛韋（武漢生物化學(xué)制藥公司，批號(hào)0408032、040911；武漢普生藥業(yè)公司，批號(hào)041201） 2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果 2.1 細(xì)菌內(nèi)毒素限值（L）的確定 根據(jù)公式L=K?M-1，式中L為細(xì)菌內(nèi)毒素限值；K為按規(guī)定的給藥途徑，人用每公斤體重每小時(shí)最大可接受的內(nèi)毒素劑量，注射劑為5EU?Kg-1?h-1、；M為本品每小時(shí)人用最大劑量，即M=15 mg?Kg-1、?h-1；計(jì)算L=5／15=0.3EU?mg-1。 2.2 鱟試劑靈敏度復(fù)核 用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水將內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成0.5、0.25、0.125、0.06 EU?ml-1的系列濃度，每一濃度取0.1ml，加入已有0.1ml鱟試劑溶液的試管中，每一濃度平行做4管，同時(shí)做陰性對(duì)照，輕輕混勻，置37±1℃水浴中，保溫1h，結(jié)果見表1。 2.3 干擾試驗(yàn)預(yù)試驗(yàn) 將供試品用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水依次稀釋成1.6、0.8、0.4、0.2mg?ml-1系列溶液，記為NPC，另制備一同樣濃度系列的樣品溶液，但在制備過程中加入含2λ濃度的內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品，記此系列為PPC，取不同廠家鱟試劑，分別與上述NPC和PPC進(jìn)行反應(yīng)，其中NPC出現(xiàn)陽性或PPC出現(xiàn)陰性則表示有干擾影響，結(jié)果見表2。 表2結(jié)果表明，注射用阿昔洛韋對(duì)鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)，在0.8mg?ml-1時(shí)，無干擾作用。用兩個(gè)廠家的鱟試劑對(duì)3批樣品檢測(cè)結(jié)果一致。 表1 鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)結(jié)果（略） 表2 預(yù)干擾試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果（略） 2.4 供試品干擾試驗(yàn) 將3批樣品用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水分別稀釋成最終濃度為0.8 mg?ml-1溶液。用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水和樣品稀釋液分別將內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品配制成濃度為0.5、0.25、0.125、0.06EU?ml-1的溶液，用2批不同廠家的鱟試劑進(jìn)行試驗(yàn)，并同時(shí)做陰性對(duì)照（NC）和供試品對(duì)照（TC）各2管，試驗(yàn)結(jié)果按公式Es=lg-1(∑Xs／4)和Et=lg-1(∑Xt／4)計(jì)算。其中Xs和Xt分別為細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水和樣品系列各反應(yīng)終點(diǎn)細(xì)菌內(nèi)毒素濃度的對(duì)數(shù)值（lg），結(jié)果見表3。表3結(jié)果表明，Es在0.5λ～2.0λ之間，且Et也均在0.5Es～2.0 Es之間，說明樣品在本實(shí)驗(yàn)條件下，對(duì)不同廠家生產(chǎn)的鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素反應(yīng)無干擾抑制作用。 表3 干擾試驗(yàn)結(jié)果（略） 表4 注射用阿昔洛韋細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)結(jié)果（略） 2.5 樣品的細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè) 將供試品稀釋成0.8 mg?ml-1的溶液，用0.25 EU?ml-1的鱟試劑檢測(cè)，同時(shí)做陰性對(duì)照、陽性對(duì)照及供試品陽性對(duì)照（PPC），結(jié)果見表4。 3 討論 注射用阿昔洛韋的細(xì)菌內(nèi)毒素限值（L）定為0.3 EU?mg-1是較為合理的，和熱原檢查控制量相一致，能保證臨床用藥安全。 注射用阿昔洛韋在進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查時(shí)，當(dāng)其終濃度在1.6 mg?ml-1以上時(shí)，有干擾抑制作用，當(dāng)其終濃度在0.8mg?ml-1及以下時(shí)，此干擾作用可排除。 注射用阿昔洛韋在進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查時(shí)，鱟試劑靈敏度至少應(yīng)在0.25 EU?ml-1 ，用靈敏度更高的鱟試劑，對(duì)供試品做更大倍數(shù)的稀釋，則效果更好。 參考文獻(xiàn) ?。?］ 中華人民共和國藥典委員會(huì). 中國藥典.二部［S］. 2005.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，附錄85 (編輯 張 達(dá)) 作者單位：455000 河南省安陽市眼科醫(yī)院 455000 河南省安陽市食品藥品檢驗(yàn)所 |
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