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【關(guān)鍵詞】 干擾試驗(yàn) 【摘要】 目的 考察生附注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的可行性。方法 按《中國(guó)藥典》2000年版細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法和細(xì)菌內(nèi)毒素法應(yīng)用指導(dǎo)原則要求進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果 將樣品稀釋成2倍后無(wú)干擾。結(jié)論 將樣品稀釋2倍，可用靈敏度0.5EU/ml的鱟試劑作細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。 關(guān)鍵詞 生附注射液 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法 干擾試驗(yàn) 生附注射液在臨床主要用于治療各型休克及心力衰竭、冠心病心絞痛、心肌梗死等心血管疾病，也可用于腦血管意外及再生障礙性貧血。其熱原檢查采用家兔法 ［1］ ，方法為取樣品溶液，劑量按家兔體重注射3kg/ml。本文參考《中國(guó)藥典》2000年版細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法 ［2］ 和細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則 ［3］ ，對(duì)生附注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查進(jìn)行了方法學(xué)研究，結(jié)果報(bào)告如下。 1 材料鱟試劑（TAL）:批號(hào):000812、010221;細(xì)菌內(nèi)毒素Ⅰ作標(biāo) 準(zhǔn):（CSE）批號(hào):0008012;細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（BET水）:批號(hào):010816;以上均為湛江安度斯生物有限公司出品;生附注射液:本院制劑，批號(hào):000818、001006、001201。XW-80A型漩渦混合器;BHW-Ⅳ型電熱恒溫水浴鍋等;玻璃試管、吸管等均經(jīng)250℃干烤1h以上。 2 方法與結(jié)果 2.1 鱟試劑靈敏度復(fù)核 按《中國(guó)藥典》2000年版二部細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法 ［2］ 操作，結(jié)果見(jiàn)表1。 表1 鱟試劑靈敏度復(fù)核結(jié)果 根據(jù)公式:靈敏度測(cè)定值λc=1g -1 （∑x/4），計(jì)算出λc:0.420;0.420;0.5∈（0.5λ～2.0λ），符合靈敏度要求。 2.2 細(xì)菌內(nèi)毒素限量值（L）的確定 ［3］ 根據(jù)公式L=K/M，式中L為細(xì)菌內(nèi)毒素限值;K為細(xì)菌內(nèi)毒素致熱閾劑量，大容量注射液一般定為10mg/（kg?h）;M為人用每公斤體重每小時(shí)最大給藥量。根據(jù)生附注射液每次最大用量為100ml，按普通中國(guó)人60kg體重計(jì)算M=1.7ml/（kg?h）;L=10/1.7=6EU/ml;MVD=L/λ=12。 2.3 干擾試驗(yàn)的預(yù)試驗(yàn) 干擾預(yù)試驗(yàn):在做干擾試驗(yàn)前，要先做干擾預(yù)試驗(yàn)。將三批經(jīng)熱原檢查合格的樣品原液，分別稀釋2、4、6、8、10倍后，制成細(xì)菌內(nèi)毒素為2λ濃度的供試品液，用λ=0.5EU/ml的TAL進(jìn)行試驗(yàn)，同時(shí)作陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照。結(jié)果稀釋2倍的供試品液均呈陽(yáng)性反應(yīng)，認(rèn)為此稀釋倍數(shù)是最高抑制濃度。 2.4 干擾試驗(yàn) 將生附注射液2倍稀釋液與內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)混合，進(jìn)行干擾試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表2。 表2 生附注射液干擾試驗(yàn)結(jié)果樣品 2.5 樣品的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查 將三批檢查合格的供試品稀釋2倍，按《中國(guó)藥典》2000年版二部的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法，依法檢查，結(jié)果供試品和陰性對(duì)照管均呈陰性，供試品 陽(yáng)性管和陽(yáng)性對(duì)照管均呈陽(yáng)性，試驗(yàn)結(jié)果成立。3個(gè)批號(hào)供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查均符合規(guī)定，與家兔法結(jié)果一致。 3 討論 3.1 試驗(yàn)結(jié)果的判定 當(dāng)鱟試劑的Es在0.5～2.0λ，且Et均在0.5～2.0Es范圍內(nèi)時(shí)，則認(rèn)為供試品在該濃度下不干擾，從表1結(jié)果看:三個(gè)批號(hào)供試品都滿足以上條件，因此認(rèn)為供試品2倍稀釋液無(wú)干擾。 3.2 鱟試劑最合適的pH范圍為6.4～8.0，pH過(guò)大或過(guò)小都會(huì)影響鱟試劑的靈敏度和細(xì)菌內(nèi)毒素的活性，而導(dǎo)致試驗(yàn)失敗 ［4］ ，本試驗(yàn)所用的生附注射液的pH值為6.5，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)影響。 3.3 鱟試劑靈敏度實(shí)測(cè)值因生產(chǎn)廠家不同而可能產(chǎn)生差異，從而導(dǎo)致兩種完全不同的檢驗(yàn)結(jié)果，實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)注意鱟試 劑的選擇。 參考文獻(xiàn) 1 衛(wèi)生部藥典委員會(huì)編.藥品標(biāo)準(zhǔn)第6冊(cè).生化藥品，第1分冊(cè)，1998，3. 2 中國(guó)藥典.第2部.2000，附錄:86. 3 中國(guó)藥典.第2部.2000，附錄:204. 4 褚衍立，張淑英，張淑梅.議鱟試驗(yàn)法中不容忽視的幾個(gè)問(wèn)題.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2000，20（1）:62. （收稿日期:2003-01-14） 作者單位:530021廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科 |
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