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摘要　目的：通過(guò)試驗(yàn)以確定碳酸氫鈉注射液可用細(xì)菌內(nèi)毒素代替?zhèn)鹘y(tǒng)的熱原檢查法。方法：用鱟試劑和家兔做對(duì)照試驗(yàn)確定靈敏度。結(jié)果：用靈敏度為0.125 EU^.ml^－1的鱟試劑進(jìn)行內(nèi)毒素檢查比家兔靈敏度高12倍。結(jié)論：細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法可以代替熱原檢查法。
關(guān)鍵詞　碳酸氫鈉注射液；抑制/增強(qiáng)試驗(yàn)；細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)；熱原試驗(yàn)

Study on BET in sodium bicarbonate injection with TAL

Zhao Xiaomeng(Zhao XM)， Yang Jiejiao (Yang JJ)， Zhu Yongquan(Zhu YQ)(The Quality-inspection Section of the Pharmaceutical Department in Shenzhen People′s hospital Shenzhen 518019)

ABSTRACT　OBJECTIVE:To determine whether bacterial endotoxins test(BET) can replace the pyrogen test for the sodium bicarbonate injection.METHODS:The comparative experiment of tachypleus amebocyte lysate(TAL) and rabbits were studied to determine the sensitivity.RESULTS:The sensitivity of TAL test was 0.125 EU^.ml^－1　WORDS, 12 times higher than that of using rabbits.CONCLUSIONS:BET may replace pyrogen test.
KEYsodium bicarbonate injection, inhibition/strengthen test, bacterial endotoxins test, pyrogen test

　　碳酸氫鈉注射液中國(guó)藥典1995年版二部、中國(guó)醫(yī)院制劑規(guī)范第2版均一直沿用家兔法進(jìn)行熱原檢查。針對(duì)醫(yī)院制劑快速檢驗(yàn)的特點(diǎn)，開(kāi)展熱原檢查法有一定困難。我們根據(jù)鱟試劑用于藥品中細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測(cè)具有靈敏、快速、實(shí)用性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，用細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)法對(duì)碳酸氫鈉注射液中的細(xì)菌內(nèi)毒素進(jìn)行了檢測(cè)，并發(fā)現(xiàn)按細(xì)菌內(nèi)毒素理論限值計(jì)算，此試驗(yàn)濃度進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查時(shí)存在假陰性反應(yīng)。針對(duì)這一問(wèn)題我們對(duì)碳酸氫鈉注射液能否用于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法進(jìn)行了考察，現(xiàn)介紹如下。

1　實(shí)驗(yàn)材料和用具

　　鱟試劑(批號(hào)970702，標(biāo)示靈敏度0.125 EU^.ml^-1，廈門鱟試劑廠)，細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào)962，每支為7200 EU，中國(guó)藥品生物制品檢定所)，鱟試劑溶解水(BET，批號(hào)970624，每支為2 ml，廈門鱟試劑廠)，碳酸氫鈉注射液(批號(hào)970512，970612，970704，深圳市人民醫(yī)院制劑中心)，ZH—2旋渦混合器(天津藥典儀器廠)，試驗(yàn)用家兔(新西蘭種，廣州試驗(yàn)動(dòng)物場(chǎng))，所用試驗(yàn)用具均經(jīng)除熱原處理。

2　實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1　供試品細(xì)菌內(nèi)毒素的理論限值計(jì)算

　　按中國(guó)藥典1995年版，本品熱原注射劑量M=10 ml^.kg^-1，靜脈給藥時(shí)臨床無(wú)任何不良反應(yīng)，細(xì)菌內(nèi)毒素閾劑量K=5 EU^.kg^-1，理論限值為L(zhǎng)=K/M=0.5 EU^.ml^-1。

2.2　鱟試劑靈敏度復(fù)核和樣品對(duì)鱟試劑抑制/增強(qiáng)試驗(yàn)

2.2.1　鱟試劑靈敏度復(fù)核　按中國(guó)藥典1995年版二部方法進(jìn)行。鱟試劑：批號(hào)970702，λ_b=0.125 EU^.ml^-1。
2.2.2　樣品對(duì)鱟試劑抑制/增強(qiáng)試驗(yàn)　取溶解好的細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品，用碳酸氫鈉注射液制成含內(nèi)毒素0.5，0.25，0.125，0.0625 EU^.ml^-1 4個(gè)濃度。每一步均在漩渦混合器上混合30 s，將鱟試劑20管排列成5列，其中4列分別加入供試品陽(yáng)性對(duì)照0.1 ml，另一列為陰性對(duì)照與鱟試劑混合，于37℃水浴中60 min觀察。結(jié)果表明供試品在0.5，0.25，0.125，0.0625，0.03125 EU^.ml^-1濃度下存在抑制作用，見(jiàn)表1。

表1　鱟試劑和供試品抑制/干擾試驗(yàn)

　　取碳酸氫鈉注射液樣品，稀釋成1∶4，1∶6，1∶8，1∶10，1∶12的濃度，混合均勻取0.1 ml加入到含有0.5，0.25，0.125，0.0625 EU^.ml^-1細(xì)菌內(nèi)毒素的鱟試劑中，37℃水浴1 h觀察，結(jié)果見(jiàn)表2。經(jīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，碳酸氫鈉注射液濃度在1∶6或以上時(shí)，對(duì)鱟試劑有抑制作用；在1∶8以下時(shí)，沒(méi)有抑制作用；故碳酸氫鈉注射液最高非抑制濃度為1∶8，試驗(yàn)濃度為1∶10。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2　供試品的最高非抑制濃度試驗(yàn)

　　選取3批樣品進(jìn)行干擾試驗(yàn)，用1∶10的供試品將每支為10 EU細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品制成
0.5，0.25，0.125，0.0625 EU^.ml^-1 4個(gè)濃度，測(cè)試1∶10試驗(yàn)濃度下對(duì)鱟試驗(yàn)的干擾情況。其結(jié)果表明，3批碳酸氫鈉注射液樣品對(duì)鱟試驗(yàn)均未出現(xiàn)抑制或增強(qiáng)。

2.5　家兔法和鱟試驗(yàn)法比較

2.5.1　用鱟試劑溶解水，將國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品962，每支為7200 EU稀釋成適當(dāng)濃度，加至碳酸氫鈉注射液中，使之制成含內(nèi)毒素1.0，1.2，1.5 EU^.ml^-1的溶液，分別按熱原檢查法和細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法對(duì)各種濃度的內(nèi)毒素溶液進(jìn)行檢查。試驗(yàn)結(jié)果表明，樣品內(nèi)含1.0，1.2 EU^.ml^-1的內(nèi)毒素均未引起家兔反應(yīng)，內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品在劑量為1.5 EU^.ml^-1時(shí)可致家兔明顯發(fā)熱反應(yīng)，而這3種濃度下的鱟試驗(yàn)法均為陽(yáng)性反應(yīng)。結(jié)果見(jiàn)表3。通過(guò)試驗(yàn)表明，細(xì)菌內(nèi)毒素法在內(nèi)毒素濃度為0.125 EU*ml^-1時(shí)鱟試劑已凝集，按兩種方法產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)反應(yīng)時(shí)內(nèi)毒素濃度之比1.5/0.125=12，即確定內(nèi)毒素法靈敏度是熱原法的12倍。

表3　熱原法和細(xì)菌內(nèi)毒素法的比較

注：①按家兔10 ml/kg劑量注射。②實(shí)驗(yàn)時(shí)室溫為26℃，室內(nèi)無(wú)任何干擾

3　討　論

3.1　碳酸氫鈉注射液的PH為7.5～8.5左右。將原液或1∶2溶液加入鱟試劑中后，出現(xiàn)白色混濁。通過(guò)抑制試驗(yàn)表明，對(duì)鱟試劑的凝集反應(yīng)產(chǎn)生強(qiáng)烈干擾，出現(xiàn)假陰性；在濃度1∶8時(shí)，則無(wú)干擾。

3.2　碳酸氫鈉注射液按最大有效稀釋倍數(shù)D=L/λ計(jì)算應(yīng)稀釋4倍，但經(jīng)最高非抑制濃度試驗(yàn)表明，在此濃度下仍有干擾，故加大稀釋倍數(shù)。通過(guò)抑制/增強(qiáng)試驗(yàn)表明，將碳酸氫鈉注射液樣品1∶10稀釋后，用標(biāo)示靈敏度0.125 EU*ml^-1的鱟試劑檢測(cè)樣品細(xì)菌內(nèi)毒素時(shí)，無(wú)抑制/增強(qiáng)作用。

3.3　經(jīng)試驗(yàn)表明，細(xì)菌內(nèi)毒素法比家兔法靈敏度高12倍，即碳酸氫鈉注射液用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法可以代替熱原檢查法。

作者單位：趙曉萌　楊戒驕　朱永泉 (深圳518019深圳市人民醫(yī)院藥學(xué)部質(zhì)檢室)

(收稿：1998-04-06)