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　　鱟試劑(TAL)能與細(xì)菌內(nèi)毒素發(fā)生非常靈敏的特異性反應(yīng)，凡能影響凝膠形成的因素，將對(duì)試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響，出現(xiàn)假陰性或假陽(yáng)性結(jié)果。我們參照《中國(guó)藥典》2000版“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法”中干擾試驗(yàn)的基本原理及細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)方法，對(duì)加替沙星氯化鈉注射液的細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)方法進(jìn)行了研究，本文探討了用鱟試劑檢查加替沙星氯化鈉注射液中細(xì)菌內(nèi)毒素可行性。

　　1  實(shí)驗(yàn)材料

　　1.1  鱟試劑(TAL)  規(guī)格：0.1ml/支，批號(hào)：20040508，靈敏度：0.25Eu/ml，廈門(mén)鱟試劑廠生產(chǎn)；規(guī)格：0.1ml/支，批號(hào)：20040212，靈敏度：0.25Eu/ml，湛江安度斯生物有限公司生產(chǎn)。

　　1.2  細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品  批號(hào)2002-3，規(guī)格180Eu/支，中國(guó)藥品生物制品檢定所生產(chǎn)。

　　1.3  細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水  50ml/瓶，批號(hào)：0411160，湛江安度斯生物有限公司生產(chǎn)。

　　1.4  加替沙星氯化鈉注射液  100ml（200mg），批號(hào)03031741，03050841，03071941，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)，熱原檢查合格。

　　1.5  玻璃儀器  1ml注射器等，臨用前250℃干烤2h備用；ZH－2型自動(dòng)旋渦混合器。

　　2  方法與結(jié)果

　　2.1  細(xì)菌內(nèi)毒素限值計(jì)算  按部頒標(biāo)準(zhǔn)WS-146(X-131)-93(2)，本品熱原檢查注射劑量D＝3ml/kg。據(jù)《中國(guó)藥典》2000年版，細(xì)菌內(nèi)毒素對(duì)家兔致熱閾改為K＝5Eu/kg，本品細(xì)菌內(nèi)毒素理論限值L

　　2.2  本品最大有效稀釋倍數(shù)MVD  MVD=L/λb≈6即為1：6倍。

　　2.3  TAL靈敏度的復(fù)核  根據(jù)所用TAL靈敏度標(biāo)示值λ＝0.25Eu/ml，用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水將細(xì)菌內(nèi)毒素滲解，在旋渦混合器上混勻（15min），并按1：2等比稀釋法將細(xì)菌內(nèi)毒素稀釋成濃度為2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ的系列內(nèi)毒素溶液，用檢查用水分別作二支陰性對(duì)照(NC)管，按《中國(guó)藥典》2000版二部和《藥品標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范》（中國(guó)藥品生物制品檢定所《中國(guó)藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范》2000版）進(jìn)行鱟試驗(yàn)操作，結(jié)果見(jiàn)表1。

　　結(jié)果經(jīng)計(jì)算表明2個(gè)批號(hào)的TAL的靈敏度測(cè)定值均在0.5λ～2.0λ之間。

　　2.4  干擾試驗(yàn)  按TAL復(fù)核試驗(yàn)項(xiàng)下方法，用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水和未檢出內(nèi)毒素加替沙星注射液及2倍稀釋液將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行稀釋，使其最終內(nèi)毒素濃度分別為2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ稀釋系列，分別各加0.1ml到已復(fù)溶的TAL反應(yīng)管內(nèi)，每濃度重復(fù)四管，同時(shí)用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水做2支陰性對(duì)照管（NC）,以上各管置37℃水浴反應(yīng)1h，觀察結(jié)果。見(jiàn)表2。表1  鱟試劑靈敏度復(fù)檢試驗(yàn)結(jié)果表2  加替沙星注射液細(xì)菌內(nèi)毒素的干擾試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果表明加替沙星氯化鈉注射液（批號(hào)03031741）1個(gè)1：2稀釋后對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法無(wú)干擾作用。另取批號(hào)（ 03050841，03071941）加替沙星氯化鈉注射液同法試驗(yàn)，所得結(jié)果相同。證明本品可用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法代替熱原檢查法。

　　3  討論

　　不同批號(hào)的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查和供試品家兔法熱原對(duì)照試驗(yàn)表明加替沙星注射液對(duì)TAL無(wú)干擾作用。家兔熱原實(shí)驗(yàn)法，它反映了熱原引起哺乳動(dòng)物復(fù)雜的體溫升高反應(yīng)過(guò)程。但家兔熱原實(shí)驗(yàn)法中，家兔的來(lái)源、品種以及其嚴(yán)格的飼養(yǎng)條件、實(shí)驗(yàn)操作要求，特別是某些抗生素、血液制品、生物制品存在影響家兔正常體溫的問(wèn)題。并且家兔熱原實(shí)驗(yàn)法本身就是一種限度試驗(yàn)，不能定量，無(wú)法標(biāo)準(zhǔn)化，靈敏度和重復(fù)性差。其局限性日益被人們所認(rèn)識(shí)。而細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法具有快速、準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，因此用它取代家兔法對(duì)加替沙星注射液進(jìn)行熱原檢查是可行的。

　　作者單位：430071 湖北武漢，武漢大學(xué)中南醫(yī)院