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          生物知識

          elisa檢測標(biāo)本處理

          作者:admin 來源:本站 發(fā)布時間: 2010-12-21 22:10  瀏覽次數(shù):
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          • 注意事項:

          收集標(biāo)本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測的標(biāo)本,儲存在 4 ℃?zhèn)溆茫缬刑厥庠蛐枰芷谑占瘶?biāo)本,將標(biāo)本及時分裝后放在 -20 ℃或-70 ℃ 條件下保存。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本2 -8 ℃ 可保存48 小時, -20℃ 可保存1 個月。 -70度可保存 6個月。部分激素類標(biāo)本需添加抑肽酶。

          • 液體類標(biāo)本:

          標(biāo)本必須為液體,不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。 1ml 的 全血可得到 0.5ml 的血清或血漿。每個標(biāo)本量收集體積= 100ul ×檢測種類。取材前須向銷售人員索要說明書。

          • 血清:

          室溫血液自然凝固 10-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) /分)。收集上清。如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

          ◇血漿:

          應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇 EDTA 、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,加入 10 %( v/v)抗凝劑 (0.1M 檸檬酸鈉或 1%heparin 或 2.0%EDTA.Na2) 混合 10-20分鐘后,離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) /分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形 成,應(yīng)再次離心。

          ◇尿液、胸腹水、腦脊液:

          用無菌管收集。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) /分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

          ◇細(xì)胞培養(yǎng)上清:

          檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) /分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的 成份時,用 PBS ( PH7.2-7.4 )稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到 100 萬 /ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) /分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

          ◇組織標(biāo)本:

          切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的 PBS ,緩沖液中可加入 1 μg/L 蛋白酶抑制劑或 50U/ml 的 Aprotinin ( 抑肽酶)。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) /分)。仔細(xì)收集上清置于 -20 度或 - 70度保存,如有必要,可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

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