【摘要】乙型肝炎病毒是當(dāng)今流行最廣泛,危害最嚴(yán)重的病毒性肝炎之一，相當(dāng)一部分乙肝攜帶者可以發(fā)展成慢性肝炎,需要接受病毒治療。目前多以其血清感染標(biāo)志物乙肝兩對(duì)半及HBV-DNA定量，作為臨床分析和判斷乙肝患者病情、療效及預(yù)后的主要依據(jù),但由于兩對(duì)半的組合模式復(fù)雜多樣,導(dǎo)致部分患者的HBV感染復(fù)制狀況難以判斷,而HBV-DNA是乙肝病毒感染和復(fù)制的特異性指標(biāo),是表明其具有傳染性的最有力的證據(jù)。但是受到實(shí)驗(yàn)室要求較高的嚴(yán)格限制,尚無(wú)法普及檢測(cè),為了進(jìn)一步探討乙肝兩對(duì)半與HBV-DNA定量結(jié)果之間的關(guān)系。本文對(duì)ELISA法檢測(cè)乙肝兩對(duì)半與熒光定量PCR檢測(cè)HBV-DNA的比較進(jìn)行分析比較。
【關(guān)鍵詞】ELISA法檢測(cè)；熒光定量PCR檢測(cè)；HBV-DNA
The ELISA law examination hepatitis B two fifty-fifty examine with fluorescence quota PCR to measure HBV-DNA the comparison
QINMeiWENBo
【Abstract】The hepatitis B virus is popular now widely, harms one of most serious toxic hepatitis, quite a part of hepatitis B carrier may develop the chronic hepatitis, needs to accept the viral treatment. At present are many by his/her the blood serum infection designated object hepatitis B two fifty-fifty and the HBV-DNA quota, takes the clinical analysis and the judgment hepatitis B patient condition, the curative effect and the prognosis main basis, but because two combination patterns fifty-fifty complex diverse, causes the partial patient's HBV infection duplication condition to judge with difficulty, but HBV-DNA is the hepatitis B virus infection and the duplication specificity target, is indicated that it has the infectious most strong evidence. But receives the laboratory request high strict limit, was still unable to popularize the examination, to further discuss the hepatitis B two fifty-fifty with the HBV-DNA quota result between relations.
【Key words】ELISA method examination; Fluorescence quota PCR examination; HBV-DNA
乙型肝炎病毒是當(dāng)今流行最廣泛,危害最嚴(yán)重的病毒性肝炎之一[1]，我國(guó)是乙型肝炎高發(fā)區(qū),年感染為7%,累計(jì)HBV感染人群為60%以上[2],受感染的個(gè)體中約10%可導(dǎo)致慢性攜帶者狀態(tài),相當(dāng)一部分乙肝攜帶者可以發(fā)展成慢性肝炎,需要接受病毒治療。目前多以其血清感染標(biāo)志物乙肝兩對(duì)半及HBV-DNA定量，作為臨床分析和判斷乙肝患者病情、療效及預(yù)后的主要依據(jù),但由于兩對(duì)半的組合模式復(fù)雜多樣,導(dǎo)致部分患者的HBV感染復(fù)制狀況難以判斷,而HBV-DNA是乙肝病毒感染和復(fù)制的特異性指標(biāo),是表明其具有傳染性的最有力的證據(jù)[3]。但是受到實(shí)驗(yàn)室要求較高的嚴(yán)格限制,尚無(wú)法普及檢測(cè),為了進(jìn)一步探討乙肝兩對(duì)半與HBV-DNA定量結(jié)果之間的關(guān)系,現(xiàn)將分析結(jié)果報(bào)告如下:
1標(biāo)本來(lái)源
2007年10月1日~2008年3月31日期間，我院住院及門診乙肝病例148例, 其中男性82例,女性66例,年齡16~72歲之間,平均年齡為33.5歲。
2方法
2.1ELISA法試劑由上海科華實(shí)業(yè)有限公司提供,使用BIO-RAD Model 680酶標(biāo)儀比色判斷結(jié)果，結(jié)果判定：樣品OD值s/c.o.≥1為陽(yáng)性，樣品OD值s/c.o.＜1為陰性。
2.2FQ-PCR法： HBV-DNA試劑盒由中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司提供, 操作嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，擴(kuò)增儀為Roche LightCycler?原裝進(jìn)口全自動(dòng)實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增儀，反應(yīng)結(jié)束后，由專用自動(dòng)分析軟件計(jì)算HBV-DNA定量結(jié)果，結(jié)果以IU/ml表示。結(jié)果判斷：≥1000IU/ml為陽(yáng)性，＜1000IU/ml為陰性。
3結(jié)果與討論
4討論
多年來(lái)，臨床對(duì)乙肝的診斷多依靠乙肝兩對(duì)半結(jié)果，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）則是主要的檢測(cè)手段，但兩對(duì)半結(jié)果反映的是機(jī)體感染HBV后的免疫狀態(tài)，提供的是HBV感染的間接依據(jù)，加之抗原、抗體蛋白的變性、窗口期的存在等等因素，因此已不是最為可靠的檢測(cè)方法。而熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（FQ-PCR）采用實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)技術(shù)，通過(guò)實(shí)時(shí)捕捉反應(yīng)體系在擴(kuò)增過(guò)程中熒光信號(hào)的變化，利用熒光信號(hào)達(dá)到某一閾值時(shí)的循環(huán)次數(shù)與起始模板DNA量的對(duì)數(shù)值之間存在嚴(yán)格的線性關(guān)系，即可對(duì)起始模板進(jìn)行定量，該法檢測(cè)的是乙肝病毒本身，因此是反映HBV復(fù)制最直接、最可靠的證據(jù)。
本次檢測(cè)結(jié)果顯示，在乙肝兩對(duì)半幾種常見(jiàn)模式中，“大三陽(yáng)”患者PCR檢測(cè)符合率極高,達(dá)到94.25%,“小三陽(yáng)”符合率達(dá)到70.45%,一般情況下HBeAb(+)表明HBV復(fù)制處于較低水平并可能和宿主DNA發(fā)生整合，導(dǎo)致含量較低，通過(guò)PCR法證實(shí)患者仍有較低水平病毒復(fù)制，所以“小三陽(yáng)”結(jié)果不能完全反映病毒在體內(nèi)的復(fù)制情況,但實(shí)際上患者的病毒基因仍然在進(jìn)行復(fù)制,像這樣的病人不可以掉以輕心；上述有1例兩對(duì)半全陰但PCR檢出為陽(yáng)性,由于PCR靈敏度較高，能檢測(cè)出體內(nèi)低水平的HBV感染,其復(fù)制表達(dá)的HBsAg量在免疫學(xué)方法檢測(cè)的極限之下,加之S基因突變?cè)斐蒆BV不再表達(dá)HbsAg，是一種變異體，而常用的免疫學(xué)方法所有的抗HBs不能與變異的HBsAg結(jié)合導(dǎo)致HBsAg(——)的HBV感染,HBV-DNA可為陽(yáng)性.只用兩對(duì)半陰性結(jié)果是無(wú)法準(zhǔn)確判斷是否存在HBV感染,但是FQ-PCR檢測(cè)能彌補(bǔ)上述不足,希望引起臨床的重視。PCR技術(shù)近年來(lái)在臨床的應(yīng)用取得較快的發(fā)展,對(duì)乙肝的治療、療效的評(píng)價(jià)有著重要的指導(dǎo)作用，對(duì)于體內(nèi)免疫力低下或使用免疫抑制劑體內(nèi)無(wú)抗體產(chǎn)生者,PCR也可以作出明確診斷,對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血、生物制品及相關(guān)從業(yè)人員查體是否具有傳染性等方面提供了一個(gè)可靠、特異、靈敏的檢測(cè)方法。因此,綜上所述, HBV-DNA是判斷HBV感染最為直接,最為可靠的標(biāo)志性指標(biāo)。
參考文獻(xiàn)
[1]葉維洪鐘振義肝炎學(xué)大典天津天津科學(xué)技術(shù)出版社1996
[2]經(jīng)卓然臨床微生物和微生物檢驗(yàn) M北京 人民衛(wèi)生出版社2003
[3]嚴(yán)根寶蒲瑞連顧建人等聚合酶鏈反應(yīng)直接檢測(cè)HBV-DNA方法改進(jìn)中華傳染病雜志1992
作者單位：550000貴州省貴陽(yáng)市第一人民醫(yī)院
本文來(lái)源于三九免費(fèi)醫(yī)學(xué)論文期刊網(wǎng):http://www.39papers.com/ 全文閱讀鏈接：http://www.39papers.com/integrated-medicine/health-medicine/3892_2.html |
