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LONZA 龍沙  細(xì)胞培養(yǎng)基

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目的  從LCM獲取的上皮細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)大腸癌各病變階段的miRNA特異性表達(dá)。驗(yàn)證大腸癌和癌前病變中的候選miRNA腫瘤標(biāo)記物。
方法  運(yùn)用優(yōu)化的LCM組織處理方法從225例正常腸上皮、癌前病變和浸潤(rùn)癌手術(shù)切除冰凍組織中獲取純凈的上皮細(xì)胞。用Agilent芯片技術(shù)對(duì)上述標(biāo)本進(jìn)行全基因組miRNA表達(dá)分析。未配對(duì)t檢驗(yàn)和方差分析對(duì)miRNA芯片數(shù)據(jù)進(jìn)行顯著性差異分析。聚類分析進(jìn)行miRNA基因表達(dá)差異的分類。用三種不同統(tǒng)計(jì)方法進(jìn)行預(yù)測(cè)性分析。運(yùn)用熒光實(shí)時(shí)定量RT-PCR進(jìn)一步驗(yàn)證14個(gè)候選的miRNA腫瘤標(biāo)記物在185例手術(shù)切除和腸鏡活檢石蠟標(biāo)本中的表達(dá)。未配對(duì)t檢驗(yàn)對(duì)miRNA在大腸癌和癌前病變中的表達(dá)進(jìn)行顯著性差異分析。受試者工作特征曲線(ROC)來評(píng)估候選miRNA腫瘤標(biāo)記物的診斷價(jià)值。多元相關(guān)分析評(píng)估多個(gè)候選miRNA腫瘤標(biāo)記物協(xié)同的診斷價(jià)值。
結(jié)果  在大腸粘膜上皮轉(zhuǎn)化和演進(jìn)過程中，存在兩個(gè)水平分類組的miRNA：第一水平分類組可以預(yù)測(cè)非腫瘤和腫瘤；第二水平分類組可以預(yù)測(cè)腺瘤和腺癌。進(jìn)一步驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)，其中7個(gè)miRNA能在手術(shù)切除的石蠟組織中區(qū)分腺瘤與腺癌及高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變與早期腸癌。miRNA-92a與miRNA-375組合鑒別高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變和早期腸癌的敏感性為95%，特異性為88%。除此之外, 這7個(gè)miRNA還能在腸鏡活檢組織中鑒別高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變和大腸浸潤(rùn)癌，結(jié)果與術(shù)后病理診斷一致。其中miR-92a具有最高敏感性達(dá)93%；miR-7具有最高特異性達(dá)94%。
結(jié)論  miRNA表達(dá)與大腸癌腫瘤病理分期有顯著的相關(guān)性。miRNA可以準(zhǔn)確預(yù)測(cè)腫瘤與非腫瘤及進(jìn)一步區(qū)分腺瘤與腺癌組織。7個(gè)miRNA腫瘤標(biāo)記物能鑒別腺瘤和腺癌及高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變和早期大腸浸潤(rùn)癌（Dukes’ A）；還能在腸鏡活檢組織中鑒別高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變和大腸浸潤(rùn)癌并與術(shù)后病理診斷一致。

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