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      生物知識

      淺表淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌組織C12蛋白芯片檢測的意義

      作者:孟嘉,李俊,孫昕 來源:安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī) 發(fā)布時間: 2011-04-07 10:54  瀏覽次數(shù):
      購買進口儀器、試劑和耗材——就在始于2001年的畢特博生物 kjhfd.cn
      【摘要】 目的 探討C12蛋白芯片檢測在淺表淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌診斷中的意義。 方法 對已知細(xì)胞學(xué)診斷的淺表淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液進行C12檢測,并同時對入選標(biāo)本患者進行血C12檢測,以病理診斷為最終標(biāo)準(zhǔn),對以上兩種結(jié)果進行對照分析。結(jié)果 在35例淺表淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌中,細(xì)胞學(xué)的正確診斷率為57.1%(20/35),淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液C12檢測陽性率為74.3%(26/35),兩者相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P <0.05);腫瘤組腫瘤標(biāo)記物(TM)指標(biāo)CA199、CEA、Beta-HCG、f-PSA、PSA、CA125、HGH、CA153在血和淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液中含量的比值具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液C12檢測對淺表淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞學(xué)檢查有一定的輔助診斷價值,但對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌的組織學(xué)分類靈敏度不高。
      主題詞】  淺表淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌組織; 細(xì)胞學(xué)檢查; 腫瘤標(biāo)志物; 診斷; 蛋白芯片
       
      多腫瘤標(biāo)志物檢測系統(tǒng)是一種集微電子、微機械、化學(xué)物理、計算機技術(shù)為一體的分析系統(tǒng),該系統(tǒng)是把多種純化的探針蛋白高密度排列在固定支持物表面上,樣品中的靶蛋白特異性地與探針結(jié)合,所以可以對待測蛋白進行定量、定性和功能分析。我國開發(fā)的C12蛋白芯片檢測系統(tǒng),是通過分析血清中12種常用腫瘤標(biāo)志物 (CA199,NSE,CEA,CA242,F(xiàn)ettitin,Beta-HCG,AFP,PSA,,f-PSA,CA125,HGH,CA153)的含量,聯(lián)合檢測以期實現(xiàn)對腫瘤的診斷和檢測[1]。本實驗旨在通過對已知細(xì)胞學(xué)診斷的淋巴結(jié)組織的進行C12檢測,并與血C12檢測結(jié)果進行比較,以病理診斷為最終標(biāo)準(zhǔn),探討對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌診斷中的臨床應(yīng)用價值。
      材料與方法
      1.1 標(biāo)本來源  取自2007年11月~2009年5月我院腫瘤內(nèi)科門診和住院惡性腫瘤患者35例,其中腺癌20例,鱗癌15例,男20例,女15例,年齡29~81(54.9±12.3)歲;取同期淋巴結(jié)良性病變15例作對照組,男9例,女6例,年齡21~64(43.4±14.7)歲;兩組之間性別、年齡具有可比性(P<0.05)。穿刺標(biāo)本常規(guī)作細(xì)胞涂片(將吸取物于載玻片上涂勻,95%乙醇固定10 min, HE染色,顯微鏡觀察有無腫瘤細(xì)胞及淋巴細(xì)胞浸潤),將穿刺針管內(nèi)殘留的吸取物約0.5~1 ml注入裝有2 ml生理鹽水的10 ml試管中并渦旋混勻,制成組織細(xì)胞懸液,置于-20℃保存,標(biāo)本不夠時再行穿刺。
      1.2 主要試劑及方法  取受試者清晨空腹靜脈血3 ml,靜置后分離血清,與淋巴結(jié)組織懸液共同采用HD-2001A生物芯片檢測儀及檢測系統(tǒng)進行測定(湖州數(shù)康生物科技有限公司),嚴(yán)格按使用說明書操作檢測。
      1.3  細(xì)胞學(xué)診斷 采用HE染色對細(xì)針穿刺圖片進行檢測。
      1.4  統(tǒng)計學(xué)處理 用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行有關(guān)率的χ2檢驗。
      結(jié)   
      2.1腫瘤組和良性病變組C12在淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液及血中陽性率比較 
      在35例淺表淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌和15例良性病變患者中,淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液C12檢測的兩樣本陽性率差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P <0.05),提示淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液C12檢測在淺表淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌中陽性率大于良性病變組;血C12檢測的兩樣本陽性率差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P <0.05),提示血C12檢測在淺表淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌中陽性率大于良性病變組。見表1、2。
      2.2 腫瘤組和良性病變組C12在血及淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液中測定結(jié)果比較 
      腫瘤組CA199、CEA、Beta-HCG、f-PSA、PSA、CA125、HGH、CA153在血和淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液中含量的比值具有統(tǒng)計學(xué)意義(P <0.05);良性病變組Beta-HCG、 f-PSA、HGH在血和淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液中含量的比值具有統(tǒng)計學(xué)意義(P <0.05)。見表3。
      2.3腫瘤組腺癌和鱗癌中的兩種C12測定結(jié)果比較 
      腺癌和鱗癌在血和淋巴結(jié)組織懸液中各項C12指標(biāo)含量比值差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P >0.05),提示 TM陽性與組織學(xué)分類無直接相關(guān)性。見表4。以病理診斷和血C12檢測標(biāo)準(zhǔn),在35例淺表淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌中,淺表淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞學(xué)的正確診斷率為57.1%(20/35),淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液C12檢測陽性率為74.3%(26/35),兩者相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P <0.05);腫瘤組淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液中的TM指標(biāo)CA199、CEA、Beta-HCG、f-PSA、PSA、CA125、HGH、CA153可以代替該C12蛋白芯片檢測系統(tǒng)在淺表淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌診斷中的應(yīng)用價值。       
       
       
      表1 腫瘤組和良性病變組淋巴結(jié)組織C12檢測結(jié)果
         淋巴結(jié)組織C12  
       腫瘤組
           良性病變組
            +
               26
              5
            -
               9
              10
      x2=7.474,P=0.006.
      表2 腫瘤組和良性病變組血C12檢測結(jié)果
          血C12
             腫瘤組
           良性病變組
            +
               29
                7
            -
               6
                8
      x2=6.822,P=0.009.
      表3 淋巴結(jié)組織和血C12測定結(jié)果比較分析( ±s)

       
      C12
       
                腫瘤組(n=35)
       
      t值
       
       P值
             良性病變組(n=15)
       
        t值
       
       P
      血                   淋巴組織
      血             淋巴組織
      CA199
      116.53±84.16   67.30±40.68
      3.08
      0.002**
      23.41±21.85   35.31±30.14
      1.24
      0.23
      NSE
      8.69±6.37         7.09±4.35
      1.23
      0.22
      3.98±1.91       6.78±4.64
      0.85
      0.40
      CEA
      10.17±2.52       8.18±2.02 
      3.65
      0.00**
      14.89±11.13    28.36±27.39
      1.76
      0.08
      CA242
      47.41±45.38      30.07±28.89
      1.91
      0.06
      8.52±4.86      12.32±10.39
      1.28
      0.21
      Ferrtin
      243.31±173.98  185.10±181.56
      1.37
      0.18
      185.10±181.56 212.88±203.49
      0.39
      0.70
      Beta-HCG
      1.17±0.89         0.59±0.23
      2.40
      0.03*
      0.58±0.36      1.54±0.96
      3.63
      0.00**
      AFP
      15.80±7.20        13.70±4.20
      1.49
      0.15
      13.79±10.65    18.27±15.49
      0.92
      0.36
      f-PSA
      0.66±0.41         1.09±0.18
      2.68
      0.00**
      5.45±1.41      18.62±14.79
      3.43
      0.00**
      PSA
      1.79±1.52         2.72±0.58
      3.38
      0.002**
      2.72±0.58       3.27±1.78
      1.14
      0.26
      CA125
      202.32±178.36  124.50±104.16
      2.23
      0.03*
      4.58±3.47       6.07±5.47
      0.89
      0.38
      HGH
      1.06±0.96        0.65±0.58
      2.16
      0.03*
      0.12±0.06       0.29±0.23
      1.31
      0.01*
      CA153
      46.02±40.79      23.85±21.23
      2.85
      0.006**
      2.65±1.14       3.48±2.21
      1.29
      0.21

      血中與淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液中C12含量測定結(jié)果比較:*P<0.05,**P <0.01
      表4 腺癌和鱗癌的兩種C12測定結(jié)果比較分析( ±s)

       
      C12
       
             腺癌(n=20)
       
      t值
       
      P值
             鱗癌(n=15)
       
      t值
       
      P
      血             淋巴組織
      血                 淋巴組織
      CA199
      86.50±77.36      48.37±44.67    
      1.91
      0.63
      167.39±152.58 146.08±135.39             
      0.40
      0.69
      NSE
      9.75±5.45       7.25±5.84
      0.46
      0.17
      5.07±3.17       3.48±1.24         
      1.81
      0.08
      CEA
      21.48±19.61      13.87±10.56         
      1.23
      0.13
      12.58±9.46      9.52±7.65             
      0.97
      0.34
      CA242
      26.45±19.47      16.24±13.14          
      1.94
      0.06
      46.18±40.14    25.47±19.47            
      1.80
      0.82
      Ferrtin
      168.90±130.10   115.56±109.55              
      0.99
      0.33
      208.47±164.47 135.47±102.26             
      1.46
      0.16
      Beta-HCG
      1.61±1.46         0.96±0.58             
      1.85
      0.07
      1.24±1.05       0.16±0.10            
      3.97
      0.00**
      AFP
      3.57±3.04         2.02±1.74           
      1.90
      0.06
      6.47±5.47       5.57±4.86             
      0.48
      0.64
      f-PSA
      0.16±0.09      0.13±0.07         
      1.18
      0.25
      0.62±0.31       0.45±0.32        
      1.48
      0.15
      PSA
      1.35±1.24      0.75±0.64           
      1.92
      0.06
      2.04±1.87       0.89±0.74           
      2.21
      0.03*
      CA125
      58.47±45.14   35.47±29.58         
      1.91
      0.06
      156.47±147.58  103.45±98.27            
      1.16
      0.26
      HGH
      1.03±0.91      0.64±0.59            
      1.61
      0.12
      1.02±0.66       0.98±0.64               
      0.17
      0.87
      CA153
      0.16±0.09      0.12±0.07
      1.57
      0.12
      65.48±47.14    10.07±4.74             
      4.53
      0.00**

      血中與淋巴組織結(jié)細(xì)胞懸液中C12含量測定結(jié)果比較:*P<0.05,**P <0.01
          
      蛋白芯片又名蛋白微陣列,就其應(yīng)用而言分為蛋白功能芯片和蛋白檢測芯片兩種類型[2]。與傳統(tǒng)蛋白質(zhì)研究方法相比,它可以在一次實驗中提供相當(dāng)大的生物信息量,使我們能夠相對全面、準(zhǔn)確的研究蛋白表達(dá)譜,這是傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)研究方法無法做到的[3]。蛋白芯片具有高度靈敏性,可以檢測出蛋白樣品中微量蛋白的存在,目前檢測水平已經(jīng)達(dá)到ng/L級[4]。因為大多數(shù)單一指標(biāo)的生物學(xué)信息已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足臨床診斷和治療的要求,而且缺乏腫瘤特異性,因某些良性疾病也可出現(xiàn)不同程度的陽性反應(yīng),為彌補單一標(biāo)志物在腫瘤檢測特異性和敏感性上的不足,聯(lián)合檢測多腫瘤標(biāo)志物可得到更有價值的信息, C12系統(tǒng)則一次性檢測定12個指標(biāo),提高了在腫瘤檢測方面的敏感性和特異性[5]。蛋白芯片技術(shù)目前廣泛應(yīng)用于各種癌癥的血清學(xué)檢測和良惡性胸腹水的診斷中,但少見于對腫瘤組織和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌及鑒別腫瘤類型的分析,以使病理診斷更加精確。劉潔瓊等[6]應(yīng)用EnvisonTM免疫組化檢測方法對108例膽囊腺癌、46例癌旁組織和35例慢性膽囊炎手術(shù)切除標(biāo)本石蠟包埋切片的CA199和CA125進行分析,結(jié)果顯示膽囊腺癌組織中的CA199和CA125的表達(dá)陽性率(49.1%、51.9%)明顯高于癌旁組織(26.1%、15.2%)和慢性膽囊炎組織(14.3、5.7%)。如果用免疫組化對腫瘤進行嗜鉻粒蛋白(Cg)、神經(jīng)特異性烯醇化酶(NSE)等檢測,陽性則支持該腫瘤為神經(jīng)內(nèi)分泌來源的診斷,如肺小細(xì)胞癌與淋巴瘤的鑒別[7]。學(xué)者[8]指出:HCG、α-HCG和β-HCG在食管鱗癌中的陽性表達(dá)率分別為56.1%、12.2%和34.1% ,這一結(jié)果與HCG、β-HCG在肺鱗癌以及HCG、β-HCG在大腸病變中的陽性表達(dá)率基本一致。
      細(xì)胞學(xué)診斷因其使用方便、創(chuàng)傷小、診斷快速,近年來成為臨床比較常用的診斷淺表淋巴結(jié)疾病的方法,但因取材太少,陽性率不高,臨床應(yīng)用受到一定限制。本研究中將淺表淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌制成組織細(xì)胞懸液,按照血C12檢測標(biāo)準(zhǔn)對懸液進行C12檢測,并對以上兩種結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果表明:淺表淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌的細(xì)胞學(xué)正確診斷率為57.1%(20/35),淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液C12檢測陽性率為74.3%(26/35),兩者相比差異有顯著性(P <0.05);淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液和血中C12檢測在淺表淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌中陽性率都大于良性病變組;腫瘤組淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液中的TM指標(biāo)CA199、CEA、Beta-HCG、f-PSA、PSA、CA125、HGH、CA153可以代替該C12蛋白芯片檢測系統(tǒng)在淺表淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌診斷中的應(yīng)用價值。本研究表明,淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液C12檢測對淺表淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞學(xué)檢查有一定的輔助診斷價值,但對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌的組織學(xué)分類靈敏度不高。
       
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      編后:本文結(jié)果需要認(rèn)真考慮,因為35例淺表淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌中,細(xì)胞學(xué)的正確診斷率為57.1%(20/35)淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液C12檢測陽性率為74.3%(26/35)”的說法需要恰當(dāng)?shù)慕忉尅?/b>

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