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| 購買進口儀器、試劑和耗材——就在始于2001年的畢特博生物 kjhfd.cn |
趙裕棟，周俊，何璟 * 華中農(nóng)業(yè)大學農(nóng)業(yè)微生物學國家重點實驗室，武漢430070 摘要:【目的】土壤中未培養(yǎng)微生物約占總量的99%，這就意味著絕大多數(shù)微生物資源還未得到開發(fā)和利用。本研究通過優(yōu)化土壤微生物總DNA的提取方法，獲得較高質(zhì)量的DNA，為后期研究土壤微生物的多樣性及構(gòu)建大插入片段的宏基因組文庫奠定基礎(chǔ)。【方法】通過綜合比較已報道的微生物DNA提取方法的優(yōu)缺點，我們設(shè)計出一種新的提取方案。對提取過程中的幾個關(guān)鍵步驟進行了優(yōu)化，包括聯(lián)合使用SDS-CTAB和溶菌酶一起來破細胞，利用氯仿除蛋白，使用PVPP柱純化DNA等。比較分析了優(yōu)化后的方法和3種已報道方法所獲得的土壤總DNA的產(chǎn)量、純度及片段大小。【結(jié)果】優(yōu)化后的方法所獲得的土壤DNA質(zhì)量明顯有所提高:每克土壤最高能提取95 gDNA，A260/A280和A260/A230比值更接近理想水平，PCR擴增能夠得到明顯的目標條帶，DNA片段最大能達到100kb左右。【結(jié)論】通過比較分析，最終確立了一種較理想的土壤微生物總DNA提取方法，為更好地開發(fā)利用土壤未培養(yǎng)微生物資源提供了有力工具。
關(guān)鍵詞:土壤微生物，eDNA抽提，DNA的產(chǎn)量及質(zhì)量，PCR擴增，大片段DNA 中圖分類號:Q93-3 文獻標識碼:A 文章編號:0001-6209(2012)09-1143-08
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基金項目:國家自然科學基金(30800020，30970059) ;教育部留學回國人員科研啟動基金項目(［2009］1590) ;教育部新世紀人才支持計劃項目(NCET-08-0779) ;中央高校基本科研業(yè)務(wù)費專項資金項目(2009PY006) * 通信作者。Tel: +86-27-87280163;E-mail:hejingjj@mail． hzau． edu． cn 作者簡介:趙裕棟(1986－) ，男，江西省九江人，2009級碩士研究生，研究方向為土壤微生物宏基因組學。E-mail:zyd3894816@yahoo． cn 收稿日期:2012-03-31;修回日期:2012-05-11
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