FastDNA SPIN Kit for Soil中文說明書
簡介
FastDNA® SPIN Kit for Soil的目的是從土壤樣品中提取基因組DNA 供PCR使用在不到30分鐘內(nèi)?？焖貲NA提取方法排除使用有害的有機溶劑，如苯酚和氯仿。該工具包可在土壤社區(qū)從所有的細菌，真菌，植物和動物的基因組DNA提取。
該試劑盒包括三個部分：
1。裂解
Lysing Matrix E tubes中含有的陶瓷和硅粒子，旨在有效地溶解所有不同來源的微生物，包括真細菌孢子和芽孢，革蘭氏陽性菌，酵母菌，藻類，線蟲和真菌。
2。均質(zhì)化試劑
MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer都經(jīng)過精心挑選和準備，使完整的樣本同質(zhì)化和蛋白增溶。試劑能夠以最小的RNA污染提取基因組DNA。
3。 DNA純化和洗脫試劑
GENECLEAN ?過程是他們用來純化基因組DNA。程序純化DNA用專門的硅膠基質(zhì)的同時消除污染物，抑制并發(fā)反應。
* Binding Matrix懸浮
* SEWS-M（鹽乙醇洗，用前加100ml乙醇）
* DES（DNA洗脫液超純水）
試驗方案
樣品處理：
1。添加500毫克的土壤到Lysing Matrix E Tube。
由于FastPrep ?儀器的移動，在管內(nèi)看到大量的聚集。相同Lysing Matrix不應超過管的體積的7 / 8。留在管的空間，也提高了更好的同質(zhì)化的機會。 [見注1] 裂解：
加入978μl Sodium Phosphate Buffer 和122μl MT Buffer。 [見注1]
2。 在FastPrep ?儀器中混勻40秒的速度6.0。
3。14000 XG離心Lysing Matrix E Tubes 5-10分鐘。[見注2]
4。上清轉(zhuǎn)移到一個2ml干凈的管。加入250μlPPS試劑和混合，用手搖動管的10次。 5。 14000 XG離心5分鐘沉淀沉淀。上清轉(zhuǎn)移到一個干凈的15毫升管。 上清液加入1ml Binding Matrix Suspension。 （Binding Matrix在用前重懸均勻）
4。上清轉(zhuǎn)移到一個2ml干凈的管。加入250μlPPS試劑和混合，用手搖動管的10次。
5。 14000 XG離心5分鐘沉淀沉淀。上清轉(zhuǎn)移到一個干凈的15毫升管。 上清液加入1ml Binding Matrix Suspension。 （Binding Matrix在用前重懸均勻）
6。放在一個旋轉(zhuǎn)器或手工反轉(zhuǎn)2分鐘，讓DNA結合基質(zhì)。將管放架上靜置3分鐘，讓硅膠基質(zhì)沉淀。
7。小心去除500μL上清，避免碰到沉淀的Binding Matrix。棄上清。重懸Binding
TMMatrix在剩余的液體中。約600μl的混合物轉(zhuǎn)移到SPIN Filter，14000 XG離
心1分鐘。倒空Catch Tube，并把剩下的上清加到SPINTM Filter中離心過濾。
8。添加500μL SEWS-M 到SPINTM Filter，離心1分鐘，在14000 XG。倒出流過液并把SPINTM Filter放回Catch Tube。14000 XG離心2分鐘，在清干SPINTM Filter中的剩余SEWS-M
9。移動SPINTM Filter到新的Catch Tube，室溫下風干5分鐘。 10。加入50-100μL DES輕輕的重懸，輕輕攪動濾膜用槍頭或渦流/手指輕彈，
9。移動SPINTM Filter到新的Catch Tube，室溫下風干5分鐘。
10。加入50-100μL DES輕輕的重懸，輕輕攪動濾膜用槍頭或渦流/手指輕彈，
重懸為高效的DNA洗脫二氧化硅矩陣。在14000 XG離心1分鐘，轉(zhuǎn)移洗脫的DNA到Catch Tube。 DNA是目前應用就緒。
注釋
請閱讀在進行任何FastPrep® DNA提取 之前 1。注1
重要：留下約0.25cc的空氣空間。如果留下太少的空氣空間，可能導致樣品的損失，由于管故障或變形。樣品的損失是由溫升FastPrep ?運行期間使壓力增加。在管內(nèi)預留0.25cc空氣空間，足夠防止在例行FastPrep ?運行中樣品損失。 2。注2
擴展到15分鐘的旋轉(zhuǎn)，可增強消除過多的碎片從大量的樣品或從復雜的細胞壁的細胞。 注意：請確認管重量平衡和管的側面和底部不會刮檫到你的離心壁，因為這將導致樣品的快速流失的重量和平衡。
擴展到15分鐘的旋轉(zhuǎn)，可增強消除過多的碎片從大量的樣品或從復雜的細胞壁的細胞。
注意：請確認管重量平衡和管的側面和底部不會刮檫到你的離心壁，因為這將導致樣品的快速流失的重量和平衡。
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